概述

回旋酶抑制劑分為四種亞群，恩諾沙星（代謝產(chǎn)物：環(huán)丙沙星）和達(dá)氟沙星屬于氟奎諾酮，是允許使用的獸用藥物。氟奎諾酮是廣譜抗菌素，廣泛應(yīng)用養(yǎng)殖業(yè)，特別是牛、豬和雞。在過去的幾年里，氟奎諾酮的使用有所增加，大量的奎諾酮類藥物被用于預(yù)防傳染病，特別是在雞、豬和魚/蝦養(yǎng)殖廠。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用免疫競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)環(huán)丙沙星。微孔板上包被有抗環(huán)丙沙星抗體。加入環(huán)丙沙星酶結(jié)合物和環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離環(huán)丙沙星與環(huán)丙沙星結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)微量反應(yīng)板上的抗環(huán)丙沙星抗體，沒有結(jié)合的酶結(jié)合物被洗去。再向反應(yīng)孔中加入相應(yīng)反應(yīng)底物TMB，作用一定時(shí)間后，結(jié)合的酶結(jié)合物將TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)丙沙星呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制

1.         已包被兔抗三聚氰胺抗體的酶聯(lián)板(Assay plate )：一塊（96孔）。

2.         標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2×100ul/瓶。

3.         樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。

4.         辣根過氧化物酶標(biāo)記環(huán)丙沙星結(jié)合物（HRP - CPFX）：1×100ul/瓶（1：100）。

5.         辣根過氧化物酶標(biāo)記環(huán)丙沙星結(jié)合物稀釋液（HRP –CPFX Diluent）：1×10ml/瓶。

6.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

7.         濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

8.         終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H₂SO4）。

需要的試劑和器材

1.         標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2.         高速離心機(jī)

3.         電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.         超聲清洗器

5.         離子交換小柱（PCX）

6.         氮?dú)獯蹈蓛x

7.         干凈的試管和Eppendof管

8.         系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

9.         蒸餾水，容量瓶等

樣品制備：

牛奶不需要處理；肉、魚、蝦等需均質(zhì)、提取、離心、稀釋。

標(biāo)本的稀釋原則：

首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。