酶聯免疫檢測儀(ELISA Reader)是酶聯免疫吸附試驗的儀器.可簡單地

　　分為半自動和全自動2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其都是一個比色計,即用

　　比色法來分析原或體的含量. ELISA測定一般要求測試液的終體積在250u l以下,用

　　一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有要求.

　　酶聯免疫吸附試驗方法

　　酶標朕免疫吸附試驗方法簡稱酶標法,是標記技中的一種,是從熒光體技,同位素

　　免疫技發展而來的一種敏感,特異,快速并且能自動化的現代技.

　　酶標法的基本原理是將原或體與酶用膠聯劑結合為酶標原或體, 此酶標原或

　　體可與固相載體上或組織內相應原或體發生特異反應,并牢固地結合形成仍保持的

　　免疫復合物.當加入相應底物時,底物被酶催化而呈現出相應反應顏色.顏色深淺與相應原

　　或體含量成正比.

　　由于此技是建立在原-體反應和酶的催化作用的基礎上,因此,具有高度的靈

　　敏性和特異性,是一種富生命力的免疫學試驗技.

酶標儀的工作原理及結構

　　酶標儀實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結構

　　和光電比色計基本相同.

　　圖示是一種單通道自動進樣的酶標儀工作原理圖.光源燈發出的光波經過濾光片或單色器

　　變成一束單色光,進入塑料微孔中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透

　　過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應

　　的電信號.電信號經前置放大,對數放大,模數轉換等信號處理后送入微處理器進行數據處理

　　和計算,后由顯示器和打印機顯示結果.

　　微處理機還通過控制電路控制機械驅動機構X方向和Y方向的運動來移動微孔板,從而實

　　現自動進樣檢測過程.而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測,因此省去了X,Y

　　方向的機械驅動機構和控制電路,從而使儀器更小巧,結構也更簡單.

　　微孔板是一種經事先包理于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的

　　小孔,孔內都包埋著相應的原或體,微孔板上每個小孔可盛放點幾毫升的溶液.其常見

　　規格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規格的孔板,對其可進行一孔

　　一孔地檢測或一排一排地檢測.

　　酶標儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得,也可用分光光度計相同的單色器來得

　　到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在

　　微孔板的后面,其效果是相同的.下圖便是目前常用的酶標儀光路系統圖.光源燈發出的光經

　　聚光鏡,光欄后到達反射鏡,經反射鏡作90o反射后垂直通過比色溶液,然后再經濾光片送到

　　光電管.

　　從酶標儀工作框圖和光路圖上可看出,它和普通的光電比色計有以下幾點差異:

　　(l)盛裝待測比色液的容器使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的

　　聚乙烯材料制成,對原體有較強的吸附作用,故用它作為固相載體.

　　(2)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標儀的光來都

　　是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液.

　　(3)酶標儀通常不用A,有時也使用光密度OD來表示吸光度.

　　酶標儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動和手動2種之分.自動型的儀器

　　有X,Y方向的機械驅動機構,可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試,手動型則

　　靠手工移動微孔板來進行測量.

　　在單通道酶標儀的基礎上又發展了多通道酶標,此類酶標一般都是自動化型的.它沒

　　有多個光束和多個光電檢測器,如 12個通道的儀器設有 12條光束或 12個光源,12個檢測

　　器和12個放大器,在X方向的機械驅動裝置的作用下,樣品12個為一排被檢測.多通道酶標

　　儀的檢測速度快,但其結構較復雜價格也較高.

　　摘自《陜學檢驗》1998.13(4)12

　　摘要 為酶標儀檢測結果的室內重復性和增強室間可比性，對已建立的酶標儀性能評價與鑒定的基本方法進行了詳細解釋和補充，以供同行在評價、鑒定儀器時參考與應用。

酶標儀的使用注意事項

　　1、工作環境

　　酶標儀是一種精密的光學儀器，因此良好的工作環境不能其準確性和穩定性，還能夠延長其使用壽命。根據DINVDE0871條例，儀器應放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據DIN45635－19條例：

　　儀器應放置在低于40分貝的環境下。

　　為延緩光學部件的老化，應避免陽光直射。

　　操作時環境溫度應在15℃－40℃之間，環境濕度在15％－85％之間。

　　操作電壓應保持穩定。

　　操作環境空氣清潔，避免水汽，煙塵。

　　保持干燥、干凈、水平的工作臺面，以及的操作空間。

　　2、操作注意事項

　　酶標儀的功能是用來讀取酶聯免疫試劑盒的反應結果，因此要得到準確結果，試劑盒的使用須規范。許多醫院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結果，操作過程隨意性較大，在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習慣，會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應注意以下事項：

　　使用加液器加液，加液頭不能混用。

　　洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機洗板，避免交叉污染。

　　嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應時間準確。

　　在測量過程中，請勿碰酶標板，以酶標板傳送時擠傷操作人員的手。

　　請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部，操作完成后請洗手。

　　如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害，請嚴格按照試

　　劑盒的操作說明，以對操作人員造成損害。

　　如果儀器接觸過污染性或物品，請進行清洗和。

　　不要在測量過程中關閉電源。

　　對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差，應根據實際情況及時修改參數，以效果。

　　使用后蓋好塵罩。

　　出現技故障時應及時與廠家聯系，切勿擅自拆卸酶標儀。

酶標儀及洗板機選購指南

酶標儀（MicroplateReader）是對酶聯免疫檢測（EIA）實驗結果進行讀取和分析的儀器。酶聯免疫反應通過偶聯在原或體上的酶催化顯色底物進行的，反應結果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測體或原的濃度。

　　酶標儀廣泛地應用在檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學中，在近幾年中，由于大量的酶聯免疫檢測試劑盒的應用，使得酶標儀在生殖保健領域中應用越來越廣泛，同時了生殖健康技水平。

　　目前國內許多計生站系統開展了酶測項目，如：乙肝五項、愛滋病檢測、優育系列檢測、激素檢測等。過去多數采用目測方法，報出的結果缺乏科學的依據。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規定為：陰性對照品的OD值×2.5，通過目測無法判斷標本孔的反應顏色是否過臨界值。肉眼進行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否過另一孔顏色的2.5倍就不可能。

　　國內多家機構，如檢驗中心和計劃生育系統等多次強調酶標儀的重要性，并要求酶聯免疫檢測試劑應使用酶標儀判讀，酶免試劑的質控也應使用酶標儀，并提供酶標儀測定的原始數據，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶測的項目往往是一些實質性的感染和病變（如：、愛滋病、優育等），判讀更要求嚴謹，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院病人前的丙肝、愛滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發的事故糾紛的要手段，正逐漸被許多單位所采用。

　　我國免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發光，在市場上的情況如下：

　　方法所處市場周期

　　放免衰退期

　　酶免成長期

　　發光進入期

　　放免技由于試劑的污染和期等問題在國際和國內市場逐漸被淘汰，而化學發光試劑和設備比較昂貴，使得其在國內的普及在計生系統普及需要較長時間，EIA技穩定，試劑價格合理，供應充，酶免技在中國市場處于成長期，因此購買酶標儀正合適宜。

　　尤其要提到的是，在中國的計劃生育和婦幼保健系統配備酶標儀已經迫在眉睫。早在幾年以前,世界衛生組織已建議對孕婦進行TORCH 五項常規篩查，但是遺憾的是由于缺乏酶標儀和洗板機等設備，RCH的檢測在中國還未能普遍開展。TORCH感染在圍產中稱為TORCH，由于孕婦,胎兒和兒都易被感染,它已受到婦產科和兒科的大重視。

　　妊娠期感染不危害母體，往往還可對胎兒和兒產生嚴重影響。通過可引起內感染而導致流產、、胎或胎兒生長遲緩和畸形，通過產道和母乳可引起兒感染。如累及經系統可造成不同程度的智力障礙以及各種癱瘓、失聰ORCH感染與優育有為重要的關系。因此，RCH（IgG和gM）檢查通常也稱為優育十項檢查。目前，TORCH的檢測方法主要有放免（RIA）和酶免(EIA)。由于放免方法需要儀器，且有放射危害，目前正被酶免（EIA）方法取代。EIA方法具有特異，靈敏度高，簡單快速，成本低等優點，只要配備有酶標儀和其他相應的設備，多數普通實驗室均可方便地開展。很顯然,盡快在計生系統普及酶標儀等設備是一個迫切的需求。

　　這項工作的落實將有助于水平，降低母嬰，從而整個國民的健康素質。目前市場上提供的EIA試劑越來越多，如：T3、 T4、TSH、TORCH系列、系列、各種癥標志物、傷寒、副傷寒等，另外通過母嬰傳播的性傳播(如、、HIV)和（如HBV、 HCV)，以及胎兒的體，兒TSH的測定，疫苗反應等，市場上也都有成套EIA試劑盒供應。使用酶標儀有利于拓展檢測項目，檢測水平，其社會效益和經濟效益并舉。

酶標儀的應用范圍

　　分類 項目名稱 簡　稱

　　血液學檢驗 血小板相關體的檢驗 PAIgA、PAIgG、PAIgM

　　D-二聚體的測定 D-Dimer

　　血清纖維蛋白降解產物的測定 FDP

　　三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸測定 T3、T4

　　免疫學檢驗 C反應蛋白的測定 CRP

　　免疫球蛋白的測定 IgD、IgE

　　循環免疫復合物的測定 CIC

　　因子的測定 IgG、IgA、IgM類RF

　　甲狀腺球蛋白體、微粒體體的測定 TG、TM

　　腫免疫學檢測 甲胎蛋白的測定 AFP

　　胚原的測定 CEA

　　特異原的測定 PSA

　　胰、膽道、的測定 CA19-9

　　的測定 CA125

　　乳的測定 CA15-3

　　宮頸鱗的測定 SCC

　　多發性骨髓的測定

　　的測定 hTG

　　免疫學檢驗 甲肝血清學的檢測 H-IgM

　　乙肝血清學的檢測 兩對半

　　丙肝血清學的檢測 H-IgG、HCV-IgM

　　丁肝血清學的檢測 HDV-IgG、HDV-IgM

　　戊肝血清學的檢測 HEV-IgG

　　腎出血熱類體的檢測 HFRS-IgG

　　乙型體的檢測 IgM

　　免疫缺陷體（即區滋病）的檢測 HIV　β 2 M

　　優育功能檢測 弓形蟲（體）的檢測 TOXO

　　風疹的檢測 RV

　　細胞的檢測 CMV

　　單純的檢測 HSV（Ⅰ、Ⅱ）

　　其　它 本儀器還可做基因檢驗及獸殘、農殘檢驗項目等