蛋白質印跡技術原理優質蛋白印跡儀
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蛋白質印跡技術原理及進展:
蛋白質印跡(Western Blot),是根據原體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。由于Western Blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。在信號轉導級聯反應中,應用Western blotting技術來檢測化學修飾(磷酸化與去磷酸化),蛋白質表達量或者狀態。
與Southern或rthern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是體,“顯色”用標記的二。經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為原,與對應的體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。
現在western blot中高靈敏度的化學發光檢測、準確定量蛋白、自動化操作和CCD成像系統已經普及,目前的發展趨勢是多通道熒光檢測。Bio-Rad公司已研發出一款集普通成像、化學發光成像、多通道熒光成像和Stain Free免染技術于一體的型成像系統Chemi Doc MP,具有的靈敏度、杰出的圖像質量、無可匹敵的應用廣泛性、系統操作簡單快捷等優點。
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