蛋白質質譜鑒定檢測服務
常見問題
1.用的什么蛋白酶酶切呢？
一般用的是胰蛋白酶或者胃蛋白酶，如果您這邊指定也是可以的，自行提供也可以。
2.比對UniProt數據庫可以嗎？
我們比對的就是UniProt數據庫。
儀器簡介
測試簡介：蛋白質譜技術簡單來說就是一種將質譜儀用于研究蛋白質的技術。它的基本原理是蛋白質經過蛋白酶的酶切消化后成肽段混合物，在質譜儀中肽段混合物電離形成帶電離子，質譜分析器的電場、磁場將具有特定質量與電荷比值（即質荷比，M/Z）的肽段離子分離開來，經過檢測器收集分離的離子，確定每個離子的M/Z值。經過可分析出每個肽段的M/Z，得到蛋白質所有肽段的M/Z圖譜，即蛋白質的一級質譜峰圖。離子選擇裝置自動選取強度較大肽段離子進行二級質譜分析，輸出選取肽段的二級質譜峰圖，通過和理論上蛋白質經過消化后產生的一級質譜峰圖和二級質譜峰圖進行比對而鑒定蛋白質。常用的方法是利用蛋白酶（包括胰蛋白酶、胃蛋白酶等，可指定）將大分子的蛋白質酶解成小分子的肽段，再過濾膜(3KD)后進入LCMSMS進行分析，樣品被離子化后進入質譜儀，得到一級質譜圖后，篩選母離子進行二級質譜圖解析肽段序列。最后綜合分析比對得出蛋白質的一級氨基酸序列。
樣品要求
1.常見樣本：常規動物組織（心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等）、葉、花、果實、種子，組織推薦送樣量：≥ 200mg；
2.膠點肉眼可見，要求條帶清晰，無降解；膠條推薦送樣2管；
3. 蛋白溶液 500ul,蛋白粉末1mg
4.寄送方式：組織或蛋白液干冰寄送；膠條或膠點常溫或冰袋寄送
5.前處理方法：常規動物組織建議方法：PBS洗滌去除殘留血液和污染物，并迅速剔除組織表面的筋皮及脂肪等結締組織，用手術剪將組織剪成1cm3 左右的小塊（約花生米般大小），將組織塊裝入凍存管中，旋緊蓋子。迅速置于液氮冷凍5min，之后轉移至-80℃ 保存，干冰運輸；
植物組織建議方法：在與研究目的不沖突的前提下，盡量選取新鮮、幼嫩、生長狀態良好的組織部位。如樣品表面污漬較多，在采集之前用無菌水擦拭或沖洗干凈，再用吸水紙吸干樣品表面殘留液體。取樣后馬上放入凍存管或者干凈的錫箔紙內，液氮速凍，-80℃保存，干冰運輸；
膠點建議方法：用移液槍頭將2D點挖下來，加入已裝有超純水的離心管中；膠條建議方法：電泳完后用R250染色。請不要使用G250染色，因為后期脫色不干凈，易產生污染。將需要鑒定的SDS-PAGE條帶切下，裝進1.5mL離心管中，每切一個條帶，清洗刀片，避免小碎膠的污染。常溫或冰袋寄送，顏色非常淺的條帶可取多個重復樣品放一起。
