N端測序 edman法檢測服務
N端測序 edman法檢測服務
樣品要求
樣品狀態：可以是干粉，溶液（不接受PVDF膜樣品）；
樣品濃度及純度：總量>200ug 純度>90% 濃度>0.5mg/ml；
如需測試氨基酸個數比較多，建議總量在2mg-3mg，純度95%或以上，濃度1mg/ml
含鹽量：揮發性無機鹽< 20 mM, 不揮發性無機鹽< 5mM, 建議不使用Tris緩沖體系，建議提供樣品的理論序列
測序樣品不返還，請保留備份
儀器簡介
Edman化學降解法是蛋白質N-端測序技術的關鍵技術，其基本原理是包括通過異硫氰酸苯脂（PITC）與蛋白質的N-端殘基的偶聯，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）環化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）轉化為苯異硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三個主要的化學步驟，每個循環從蛋白質N端裂解一個氨基酸殘基，同時暴露出新的游離的氨基酸進行下一個Edman降解，然后通過轉移的PTH-氨基酸鑒定實現蛋白質序列的測定。
Edman測序法是一種用于鑒定蛋白質序列的測序技術。純化好蛋白質后，確認需要檢測的某個序列，并把這個序列還原成更小的片段（如果要測的蛋白質很大的話，那就需要將蛋白質還原成更小更小的片段）之后，就可以使用Edman測序法來檢測蛋白序列了。Edman測序法可以直接分析氨基酸信息，并且不需要借助任何蛋白質數據庫，因此，Edman測序可以對全新的沒有數據庫信息的蛋白質進行N端序列分析。
盡管Edman法技術已應用較多，但仍有不足之處，例如Edman降解法不能解決N端封閉的測序問題（環化、封閉）、被修飾的蛋白不能給出確切的信號，銘研生物在此技術基礎上加入質譜法，質譜法不受N末端封閉的限制，能對側鏈基團翻譯后加工或化學修飾進行定位，靈敏度有提高，因而具有其優點，與傳統的Edman降解法相互補。
Edman測序是如何進行的？
1. 耦合（Coupling），使用異硫氰酸苯酯（也稱為PITC）與蛋白樣品進行反應。這種試劑的作用是在溫和的堿性條件下與氨基的N端反應，形成苯硫氨酰（PTC）加合物;
PITC結構圖
2. 分離（Cleavage），在強酸的作用下，對N末端氨基進行切割。因為每次只切除末端的最后一個氨基，循環進行，直到切除最后一個氨基，即可獲取全部序列信息;
3. 轉換（Conversion），將與PITC結合的殘基轉化成更穩定的PTH殘基，進行后續測定步驟（這步使得結構變得更穩定）。
原理圖：
常見問題
1.不確定我的樣品的N端是否封閉怎么辦？
可以按照正常流程測試，但是會影響實驗結果，這種情況下我們是正常收費的，請理解。
2.蛋白純度沒有95%，只有92%可以嗎？
可以嘗試，但本平臺無法保證結果符合預期。
