麻痹性貝類毒素(PSP)檢測試劑盒的詳細信息

1．概述本檢測采用酶聯免疫法定量檢測麻痹性貝類毒素的存在。神經性貝毒是一種毒素，石房蛤毒素是麻痹性貝類毒素的一種。本檢測可用于水產樣本對貝類毒素的定性和定量檢測，例如甲殼類動物的樣本。對于甲殼類動物的需要提前制備樣本。如果條件允許，陽性樣本可以做HPLC，GC/MS或其他方法確認。2．安全性說明標準品溶液含有少量的石房蛤毒素。底物溶液含有四甲基聯苯胺，終止液還有稀硫酸。避免皮膚與粘膜與終止液接觸。若終止液與皮膚接觸，可用水洗去。3．貯藏與穩定性試劑盒貯存在4-8 °C。使用前試劑盒中溶液要恢復到室溫（20 —25度）。在保質期內試劑盒都可以正常使用。4．檢測原理本實驗采用直接競爭ELISA方法，用特異性抗體識別石房蛤毒素。樣本中的石房蛤毒素可與石房蛤毒素-酶結合物競爭，同包被在微孔板上的兔抗-石房蛤毒素抗體結合。石房蛤毒素抗體與包被在微孔底部的二抗結合。洗板后加入底物溶液，顯藍色。藍色的深度與石房蛤毒素在樣本中的濃度成反比。顏色反應在規定時間內終止，顏色用酶標儀讀值。每孔的樣本濃度值可以通過標準曲線來讀取。5．試劑盒局限性和可能的干擾樣本中經常存在的大量的無機物和有機物經檢測，并未為發現影響試劑盒的檢測結果。然而，由于樣本中發現有易變質的混合物，由它們引起的基質反應不可避免地會影響檢測結果。操作失誤也可能造成實驗錯誤。如：貯存的問題。加樣次序錯誤，加入溶液的體積錯誤，孵育的時間過長或者過短，影響免疫反應或者底物反應，實驗過程中溫度過低或者過高（低于10℃，大于30℃）。本試劑盒提供篩查神經性貝毒的篩查結果。陽性樣本可采取其他的分析方法（GC,HPLC，其他方法）證明。A.試劑盒組成1．真空包裝微孔板 （12 × 8條），包被一種羊抗兔二抗2．標準液（6）：0, 0.02, 0.05, 0.1,0.2 和0.4 ng/mL (ppb) 3．1 瓶6mL抗體（兔抗石房蛤毒素抗體）4．1 瓶6mL石房蛤毒素-HRP酶標記物5．2瓶25ml樣品稀釋緩沖液(10倍濃縮)(即用即配，例如：10ml濃縮緩沖液 90ml蒸餾水)6．1瓶100ml洗板緩沖液(5倍濃縮) (即用即配，例如：10ml濃縮緩沖液 40ml蒸餾水)7．1 瓶12 mL 底物（顯色液TMB）8．1 瓶 12mL 終止液B.操作步驟1、在對應的微孔中加入50μL的標準和樣品（推薦做2-3個重復）2、每個測試孔都加入50 μL 石房蛤毒素酶標記物溶液。3、每個測試孔都加入50 μL石房蛤毒素抗體溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。不要使液體灑出。4、在室溫下孵育30分鐘。5、孵育完成后，把封口膜取掉，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。6、每個測試孔加入100μL的顯色液（底物）。封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。不要使液體灑出。室溫孵育20-30分鐘，此步驟避免太陽光照射。7、每個測試孔加入100μL終止液。8、用酶標儀在450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）（在加入終止液15分鐘內完成）。C 結果分析結果分析可以利用商業ELISA分析軟件(4-parameters,Logit/Log)。手工計算可以先計算標準的吸光度值的平均值，然后計算每個標準的%B/B0（用其它標準的吸光度值除以零標準的吸光度值乘以100%）。以每個標準的%B/B0做Y軸，以每個標準的石房蛤毒素的濃度做X軸構建標準曲線。通過利用標準曲線，把樣品的%B/B0代入標準可以計算出樣品中岡田酸的濃度。樣品中石房蛤毒素的含量小于0.02 ppb認為陰性。當樣品中石房蛤毒素的含量大于0.4 ppb要稀釋后再測定。