血細胞分類計數器頁面推廣
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主推種類有:WZR-BM2型多功能血細胞分類儀WZR-BM3型血細胞分類儀WZR-BM4型血細胞分類儀
進口流式細胞儀操作規程
目的:流式細胞儀開機程序、預設獲取模式文件、設定和調整、樣品分析、關機程序
一.開機程序
1.檢查穩壓器電源,打開電源,穩定5分鐘。
2.打開儲液箱,倒掉廢液,
并在廢液桶中加入400ml漂白水原液。打開壓力閥,取出鞘液桶,將鞘液桶加至4/5滿(一般可用三蒸水,做分選必須用PBS或FACSFlow),合上壓力閥。確實蓋緊桶蓋,檢查所有管路是否妥善安置。
3.將FACSCalibur開關打開,此時儀器功能控制鈕的顯示應是STANDBY,預熱5-10分鐘。排出過濾器內的氣泡。
4.如果需要打印,打開打印機電源。
5.打開電腦,等待屏幕顯示出標準的蘋果標志。
6.執行儀器PRIME功能,以排除Flow cell中的氣泡。
7.分析樣品時,先用FACAFlow 或PBS進行HIGH RUN約2分鐘。
X做過分選后,每次開機后需沖洗管道:向分選裝置上裝上兩個50ml離心管,不接通濃縮系統,摁下右下角白色按鈕開始沖洗。待自動停止后接通濃縮裝置,同上法沖洗。
二.預設獲取模式文件(Acquisition Template Files)
1.從蘋果標志中選擇CELLQuest見一個新視窗,可利用此視窗編輯一個獲取模式文件。
2.選取屏幕左列繪圖工具中的Dot plot,繪出一個或多個Dot Plots(點圖)。從Dot
Plot對話框中選取Acquisition作為圖形資料來源,并確定適當的x軸和y軸參數。
3.選取屏幕左列繪圖工具中的Histogram,同上法可繪出Histogram(直方圖)。
4.將此視窗命名后儲存于FACStation G3BD Applications CELLQuest Folder
EXP文件夾中,下次進行相同實驗時可直接調用。
X本計算機中已設定兩個模式文件:ACQ和EXP,儲存于FACStation G3BD Applications CELLQuest
EXP文件夾中,ACQ用于細胞DNA檢測,EXP用于細胞表面標志分析。
三.用CELLQuest進行儀器的設定和調整
1.從蘋果畫面中選取CELLQuest,進入CELLQuest后在File指令欄中打開合適的獲取模式文件。
2.從屏幕上方Acquire指令欄中,選取Connect to Cytometer(快捷鍵: +B)進行電腦和儀器的連機。將出現的Acquisiton
Control對話框移至合適位置。
3.從Cytometer指令欄中,開啟Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四個對話框,并將它們移至屏幕右方,以便獲取數據時隨時調整獲取條件。也可以用
+1,2,3,4獲得此四個對話框。
4.在Detectors/Amps對話框中,先為每個參數選擇適當的倍增模式(amplifier
mode):線性模式Lin或對數模式Log。一般進行細胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴細胞亞群時,FSC和SSC多以線性模式Lin測量,且DDM
Param選擇FL2,而FL1,
FL2與FL3則以對數模式Log測量;分析細胞DNA含量時,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3皆以Lin進行測量,且DDM
Param選擇FL2;分析血小板表型時,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3等均以Log進行測量。
5.放上待檢測的樣品,將流式細胞儀設定于RUN,流速可在HIGH 或LOW上。
6.在Acquisiton
Control對話框中,選取Acquire,開始獲取細胞。在以下的儀器調整過程中隨時選取Pause,Restart以觀察調整效果。未完全調整好之前不要去掉SETUP前的“3”。
7.在Detectors/Amps對話框中,調整FSC和SSC探測器中的信號倍增度:PMT voltages(粗調)與Amp
Gains(細調),使樣品信號出現在FSC-SSC點圖內,且三群細胞合理分布。
8.在Threshold
對話框中選擇適當的參數設定Threshold,并調整Threshold的高低,以減少噪音信號(細胞碎片)。一般做細胞表型時用FSC-H而做DNA時用FL2-H。Threshold并不影響檢測器對信號的獲取,但可改善畫面質量。
9.從屏幕左列繪圖工具中選取Region(區域),并在靶細胞周圍設定區域線,即通常所說的門。圈定合適的細胞群可使儀器調整更為容易。
10.Detectors/Amps對話框中,調整熒光檢測器(FL1, FL2, FL3,
FL4等)的倍增程度。根據所用的熒光陰性對照樣品調整細胞群,使之分布在正確的區域內。
11.在Compensation對話框中,根據所用的調補償用標準熒光樣品調整雙色(或多色)熒光染色所需的熒光補償。比如應該為FL1+ FL2-
的細胞群卻分布在FL1+ FL2+區域內,則需調大FL2-?%FL1中的“?”,并從FL1-FL2點圖中觀察新的調整是否恰當
12.在Status對話框中可見:Laser Power:正常值—Run/Ready為14.7mW,Standby為5mW;Laser
current:正常值為6Amps左右。
13.調整好的儀器設定可在Instrument Settings對話框中儲存,下次進行相同實驗時可調出使用,屆時只需微調即可。
X本計算機中已有三個名叫儲存于FACStation G3 BD Applications CELLQuest Folder
IMM-InstrSettings及FACStation G3 BD Files Instrument Settings Files
CalibFile和Mast-Cell-Set的參數文件,前二者可用于分析人白細胞,后者用于分析小鼠肥大細胞。
四.通過預設的獲取模式文件進行樣品分析
1.從蘋果標志中選擇CELLQUEST,新視窗出現后從File指令欄中選擇Open,打開預設的獲取模式文件。
2.從屏幕上方Acquire指令欄中,選取Connect to Cytometer進行電腦和儀器的連機。將出現的Acquisiton
Control對話框移至合適位置。
3.從Cytometer指令欄中選取Instrument Settings,在其對話框中選擇Open以調出以前存儲的相同實驗的儀器設定,按Set 確定。
4.在Acquire指令欄中,選擇Acquisition&Storage決定儲存的細胞數,參數,信號道數。其中Resolution在做細胞表面標志時選擇256,做DNA時選擇1024。Parameter
Saved…則根據不同的檢測對象選擇不同的參數。
5.在Acquire指令欄中,選擇Parameter
Description,以決定文件存儲位置(folder),文件名稱(file),樣品代號以及各種參數的標記(panel),即安排tube1,2,3…的檢測參數。一般本儀器獲取的數據按照檢測對象的不同分別儲存于FACStation
G3BD Applications CELLQuest IMM 和DNA 文件夾中。文件根據日期命名。
6.在Cytometer指令欄中,選擇Counters,將此對話框移至合適位置,以便于隨時觀察events計數。
7.將樣品試管放至檢測區,在Acquire Control對話框中選取Acquire以啟動樣品分析測定。
8.微調儀器設定,待細胞群分布合適后選擇Acquire Control對話框中Pause, Abort,
去除Setup前的“3”,開始正式獲取信號,存儲數據。
9.當一定數目的細胞被測定后,獲取會自動停止,并會自動存儲數據。重復步驟7,繼續分析下一個樣品,直到所有的樣品數據分析完畢。
X當所有樣品分析分析完畢,即換上三蒸水,并將流式細胞儀置于“STANDBY”狀態,以保護激光管。
五.關機程序:
1.從File中選擇Quit, 退出軟件,選擇Don’t Save至蘋果屏幕。
2.用4ml 1:10稀釋的漂白水作樣品,將樣品置于旁位(vacuum is on),以外管吸去約2ml,在將樣品架置于中位(vacuum is
off),再HIGH RUN 5分鐘(內管吸去2ml)。
3.改用三蒸水4ml作樣品,同上處理。
4.按Prime三次。
5.此時儀器自動轉為STANDBY狀態,換2ml三蒸水。必須在儀器處于“STANDBY”狀態
10分鐘后再依次關掉計算機、打印機、主機、穩壓電源,以延長激光管壽命,并確保應用軟件的正常運行。
6.填寫使用登記表。
流式細胞儀主要技術指標
1.流式細胞儀的分析速度:
一般流式細胞儀每秒檢測1000~ 5000個細胞,大型機可達每秒上萬個細胞。
2.流式細胞儀的熒光檢測靈敏度:一般能測出單個細胞上<600個熒光分子,兩個細胞間的熒光差>5%即可區分。
3.前向角散射(FSC)光檢測靈敏度:前向角散射(FSC)反映被測細胞的大小,一般流式細胞儀能夠測量到0.2μm~0.5μm。
4.流式細胞儀的分辨率:通常用變異系數CV值來表示,,一般流式細胞儀能夠達到<2.0%,這也是測量標本前用熒光微球調整儀器時要求必須達到的。
5.流式細胞儀的分選速度:一般流式細胞儀分選速度>1000個/秒,分選細胞純度可達99%以上。
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WZR-BM2型多功能血細胞分類儀
產品介紹
WZR-BM2型多功能血細胞分類儀,使用時與顯微鏡配套,主要用于骨髓細胞分類計數,改變了長期以手記、手算、心記、心算的工作狀態,避免了漏計、多記、錯記或錯算等情況,可提高工作效率4-5倍,適用于醫院血液、檢驗等科應用。
設計先進、體積小巧、性能可靠。
自動循環顯示骨髓細胞分類數及白紅、粒紅比例等指標。
分析計算細胞化學染色陽性率、積分數。
會發出不同頻率音響,到預定數會發信號。
有17種計算功能(包括統計學功能)。
技術性能
本電腦采用Intel公司MCS系列單片微處理器及進口大規模集成電路構成。
電源:220或110V±10%,機器工作電壓:直流9V(外接穩壓電源),平均功耗小于4W。
電腦共有32個進口鍵,分上下二檔,有專用醫學符號表示,操作方便。
輸出用8只LED顯示塊顯示,可辨性強。
外形尺寸:220mm×166mm×47mm。
重量:0.6kg。
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