Dual-PAM-100: 一套空前強(qiáng)大的測(cè)量系統(tǒng)
Schreiber教授因發(fā)明PAM系列調(diào)制葉綠素?zé)晒鈨x而獲得首屆國(guó)際光合作用協(xié)會(huì)（ISPR）創(chuàng)新獎(jiǎng)
1985年開始商品化的全世界臺(tái)調(diào)制熒光儀PAM-100被幾代科學(xué)家所廣泛采用。Dual-PAM-100相當(dāng)于兩臺(tái)PAM-100的功能。一方面，它繼承了PAM-100的所有優(yōu)點(diǎn)，可以進(jìn)行復(fù)雜的葉綠素?zé)晒夥治觯≒S II活性）；另一方面，它還可以通過(guò)測(cè)量P700的吸收變化來(lái)檢測(cè)PS I的活性。特別需要強(qiáng)調(diào)的是，Dual-PAM-100可以在完全同步的情況下測(cè)量葉綠素?zé)晒夂蚉700吸收變化。此外，通過(guò)特殊的激發(fā)-檢測(cè)單元還可以測(cè)量葉綠體或微藻的許多重要光合參數(shù)，如跨膜質(zhì)子梯度delta pH（通過(guò)9-AA熒光或吖啶黃熒光）、類囊體膜的電勢(shì)（通過(guò)類胡蘿卜素的差示吸收，“P515”）和NADP的氧還狀態(tài)（通過(guò)NADPH熒光）等。如果需要極高的靈敏度可以通過(guò)連接光電倍增管檢測(cè)器實(shí)現(xiàn)。
主要功能 * 單獨(dú)或同步測(cè)量微藻、大藻、水生植物等的葉綠素?zé)晒猓ü庀到y(tǒng)II活性）和P700（光系統(tǒng)I活性）
* 兩個(gè)光系統(tǒng)的誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線（包括快相和慢相）
* 兩個(gè)光系統(tǒng)的快速光曲線和光響應(yīng)曲線
* 淬滅分析、暗馳豫分析
* 典型的P700曲線測(cè)量
* 通過(guò)葉綠素?zé)晒夂蚉700的同步測(cè)量獲知兩個(gè)光系統(tǒng)的電子傳遞動(dòng)力學(xué)、電子載體庫(kù)的大小、圍繞PSI 的環(huán)式電子傳遞動(dòng)力學(xué)等
應(yīng)用領(lǐng)域
先進(jìn)的測(cè)量光合作用的技術(shù)，已被成功應(yīng)用于高等植物和藍(lán)藻的P700和葉綠素?zé)晒鉁y(cè)量中，用于光合作用機(jī)理、脅迫生理學(xué)、生理生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域。在其它微藻和大型海藻中的應(yīng)用還處于起步階段，恰恰也是比較容易出成果的領(lǐng)域。
測(cè)量參數(shù)PS II參數(shù)： Fo, Fm, F, Fm’, Fv/Fm, Y(II)=△F/Fm’, Fo’, qP, qL, qN, NPQ, Y(NPQ), Y(NO)和ETR(II)等
PS I參數(shù)： P700, Pm, Pm’, P700red, Y(I), Y(ND), Y(NA)和ETR(I)等
Dual-PAM-100的這些特點(diǎn)開啟了基礎(chǔ)光合作用研究和應(yīng)用光合作用研究的新途徑。過(guò)去，同步測(cè)量PS I和PS II的量子產(chǎn)量需要很強(qiáng)的背景和熟練的操作技巧，只有光合作用領(lǐng)域的少數(shù)會(huì)這項(xiàng)技術(shù)。現(xiàn)在，即使是初學(xué)者，也可迅速掌握同步測(cè)量PS I和PS II活性的技術(shù)，不再需要復(fù)雜的操作技巧。
主要技術(shù)參數(shù)
P700雙波長(zhǎng)測(cè)量光：LED，830 nm和870 nm
PSII熒光測(cè)量光：LED，460 nm（DUAL-DB）或620 nm（DUAL-DR）
紅色光化光：LED陣列，635 nm；連續(xù)光強(qiáng)2000 μmol m-2 s-1
藍(lán)色光化光：LED，460 nm；連續(xù)光強(qiáng)700 μmol m-2 s-1
單周轉(zhuǎn)飽和閃光（ST）：200000 μmol m-2 s-1，5～50 μs可調(diào)
多周轉(zhuǎn)飽和閃光（MT）：20000 μmol m-2 s-1，1～1000 ms可調(diào)
Kramer的新熒光參數(shù)資料，這是一篇2004年發(fā)表在Photosynthesis Research 上的文章，見(jiàn)如下描述:
Kramer提出的新參數(shù)：
qL，用于代替qP
Y（II）＝Y(jié)＝（Fm’-F）/Fm’
Y（NPQ) 表征PS II處過(guò)量光能耗散為熱，與光保護(hù)有關(guān)
Y（NO） 表征PS II處過(guò)量光能引起的光損傷
Y(II)+Y(NPQ)+Y(NO)=1
Schreiber教授和其學(xué)生Klughammer博士新設(shè)計(jì)的Dual-PAM-100中，借鑒測(cè)量葉綠素?zé)晒獾姆椒ǎ略隽藥讉€(gè)參數(shù)：
Y（I） PS I的量子產(chǎn)量或PS I的光合效率
Y（ND) 表征PS I處過(guò)量光能耗散為熱，與光保護(hù)有關(guān)
Y（NA） 表征PS I處過(guò)量光能引起的光損傷
Y(I)+Y(ND)+Y(NA)=1
色素分子處于氧化態(tài)和還原態(tài)時(shí)，或增加/減少亞基后，其吸收峰會(huì)有變化。基于此原理，P700吸收變化、P515吸收變化（類胡蘿卜素能態(tài)）、P505吸收變化（葉黃素循環(huán)）等均可通過(guò)Dual-PAM-100測(cè)量。主機(jī)共用，只是更換激發(fā)-檢測(cè)單元即可。此外，Dual-PAM-100還可用于測(cè)量NADPH熒光、9AA熒光（跨膜質(zhì)子梯度）等。
部分利用DUAL-PAM-100研究藻類的P700文獻(xiàn)
1.Ma W, Mi H, Shen Y: Influence of the redox state of QA on phycobilisome mobility in the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803 Journal of Luminescence2010:in press.[DUAL-PAM-100]
2.Bernát G, Waschewski N, Rögner M: Towards efficient hydrogen production: the impact of antenna size and external factors on electron transport dynamics in Synechocystis PCC 6803 Photosynthesis Research2009, 99(3):205-216.[DUAL-PAM-100]
3.Chiu Y-F, Lin W-C, Wu C-M, Chen Y-H, Hung C-H, Ke S-C, Chu H-A: Identification and characterization of a cytochrome b559 Synechocystis 6803 mutant spontaneously generated from DCMU-inhibited photoheterotrophical growth conditions Biochimica et Biophysica Acta2009, 1787(10):1179-1188.[DUAL-PAM-100]
4.Grouneva I, Jakob T, Wilhelm C, Goss R: The regulation of xanthophyll cycle activity and of non-photochemical fluorescence quenching by two alternative electron flows in the diatoms Phaeodactylum tricornutum and Cyclotella meneghiniana Biochimica et Biophysica Acta 2009, 1787(7):929-938.[DUAL-PAM-100]
5.Kromkamp JC, Beardall J, Sukenik A, Kopeck J, Masojidek J, van Bergeijk S, Gabai S, Shaham E, Yamshon A: Short-term variations in photosynthetic parameters of Nannochloropsis cultures grown in two types of outdoor mass cultivation systems. Aquatic Microbial Ecology2009, 56:309-322.[DUAL-PAM, Flow-Through WATER-PAM]
6.Lin A-P, Wang G-C, Yang F, Pan G-H: Photosynthetic parameters of sexually different parts of Porphyra katadai var. hemiphylla (Bangiales, Rhodophyta) during dehydration and re-hydration Planta2009, 229(4):803-810.[DUAL-PAM-100]
7.Perreault F, Ali NA, Saison C, Popovic R, Juneau P: Dichromate effect on energy dissipation of photosystem II and photosystem I in Chlamydomonas reinhardtii. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology2009, 96(1):24-29.[DUAL-PAM-100]
8.Schultze M, Forberich B, Rexroth S, Dyczmons NG, Roegner M, Appel J: Localization of cytochrome b6f complexes implies an incomplete respiratory chain in cytoplasmic membranes of the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 Biochimica et Biophysica Acta2009, 1787(12):1479-1485.[DUAL-PAM-100]
9.Sukenik A, Beardall J, Kromkamp JC, Kopeck J, Masojídek J, van Bergeijk S, Gabai S, Shaham E, Yamshon A: Photosynthetic performance of outdoor Nannochloropsis mass cultures under a widerange of environmental conditions. Aquatic Microbial Ecology2009, 56(2-3):297-308.[DUAL-PAM-100, FLOW THROUGH WATER-PAM]
10.Tsunoyama Y, Bernát G, Dyczmons NG, Schneider D, Rögner M: Multiple rieske proteins enable short- and long-term light adaptation of Synechocystis sp. PCC 6803. Journal of Biological Chemistry2009, 284:27875-27883.[DUAL-PAM-100]
11.Bailey S, Melis A, Mackey KRM, Cardol P, Finazzi G, Dijken Gv, Berge GM, Arrigo K, Shrager J, Grossman A: Alternative photosynthetic electron flow to oxygen in marine Synechococcus Biochimica et Biophysica Acta 2008, 1777(3):269-276.[DUAL-PAM-100, WATER-PAM]
12.François P, Nadia AA, Cyril S, Philippe J, Radovan P: Alteration of Energy Dissipation by Dichromate in Xanthophyll Deficient Mutants of Chlamydomonas reinhardtii In: Photosynthesis Energy from the Sun: 14th International Congress on Photosynthesis. Edited by Allen JF, Gantt E, Golbeck JH, Osmond B: Springer; 2008: 1535-1538.
13.Ma W, Chen L, Wei L, Wang Q: Excitation energy transfer between photosystems in the cyanobacterium Synechocystis 6803 Journal of Luminescence2008, 128(3):546-548.[DUAL-PAM-100]
14.Ma W, Wei L, Wang Q: The response of electron transport mediated by active NADPH dehydrogenase complexes to heat stress in the cyanobacterium Synechocystis 6803 Science in China2008, 51(12):1082-1087.[dual-pam-100]
15.Xu M, Bernát G, Singh A, Mi H, Rögner M, Pakrasi HB, Ogawa T: Properties of mutants of Synechocystis sp. strain PCC 6803 lacking inorganic carbon sequestration systems. Plant Cell and Physiology2008, 49(11):1672-1677.[DUAL-PAM-100]
Schreiber教授因發(fā)明PAM系列調(diào)制葉綠素?zé)晒鈨x而獲得首屆國(guó)際光合作用協(xié)會(huì)（ISPR）創(chuàng)新獎(jiǎng)
1985年開始商品化的全世界臺(tái)調(diào)制熒光儀PAM-100被幾代科學(xué)家所廣泛采用。Dual-PAM-100相當(dāng)于兩臺(tái)PAM-100的功能。一方面，它繼承了PAM-100的所有優(yōu)點(diǎn)，可以進(jìn)行復(fù)雜的葉綠素?zé)晒夥治觯≒S II活性）；另一方面，它還可以通過(guò)測(cè)量P700的吸收變化來(lái)檢測(cè)PS I的活性。特別需要強(qiáng)調(diào)的是，Dual-PAM-100可以在完全同步的情況下測(cè)量葉綠素?zé)晒夂蚉700吸收變化。此外，通過(guò)特殊的激發(fā)-檢測(cè)單元還可以測(cè)量葉綠體或微藻的許多重要光合參數(shù)，如跨膜質(zhì)子梯度delta pH（通過(guò)9-AA熒光或吖啶黃熒光）、類囊體膜的電勢(shì)（通過(guò)類胡蘿卜素的差示吸收，“P515”）和NADP的氧還狀態(tài)（通過(guò)NADPH熒光）等。如果需要極高的靈敏度可以通過(guò)連接光電倍增管檢測(cè)器實(shí)現(xiàn)。
主要功能 * 單獨(dú)或同步測(cè)量微藻、大藻、水生植物等的葉綠素?zé)晒猓ü庀到y(tǒng)II活性）和P700（光系統(tǒng)I活性）
* 兩個(gè)光系統(tǒng)的誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線（包括快相和慢相）
* 兩個(gè)光系統(tǒng)的快速光曲線和光響應(yīng)曲線
* 淬滅分析、暗馳豫分析
* 典型的P700曲線測(cè)量
* 通過(guò)葉綠素?zé)晒夂蚉700的同步測(cè)量獲知兩個(gè)光系統(tǒng)的電子傳遞動(dòng)力學(xué)、電子載體庫(kù)的大小、圍繞PSI 的環(huán)式電子傳遞動(dòng)力學(xué)等
應(yīng)用領(lǐng)域
先進(jìn)的測(cè)量光合作用的技術(shù)，已被成功應(yīng)用于高等植物和藍(lán)藻的P700和葉綠素?zé)晒鉁y(cè)量中，用于光合作用機(jī)理、脅迫生理學(xué)、生理生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域。在其它微藻和大型海藻中的應(yīng)用還處于起步階段，恰恰也是比較容易出成果的領(lǐng)域。
測(cè)量參數(shù)PS II參數(shù)： Fo, Fm, F, Fm’, Fv/Fm, Y(II)=△F/Fm’, Fo’, qP, qL, qN, NPQ, Y(NPQ), Y(NO)和ETR(II)等
PS I參數(shù)： P700, Pm, Pm’, P700red, Y(I), Y(ND), Y(NA)和ETR(I)等
| 與PAM-100相比，Dual-PAM-100的主要特點(diǎn)：1）Dual-PAM-100完全由電腦控制，通過(guò)的Windows操作軟件DualPAM進(jìn)行。 2）軟件DualPAM除了基本的系統(tǒng)操作外，還提供許多特定的測(cè)量程序。 3）所有必需的光源（激發(fā)葉綠素?zé)晒獾募t光和藍(lán)光、測(cè)量P700的近紅外光、紅色和藍(lán)色的光化光、單脈沖與多脈沖飽和閃光、遠(yuǎn)紅光）均整合在基礎(chǔ)系統(tǒng)中，不再需要復(fù)雜的電纜連接。 4）采用了專為Dual-PAM-100設(shè)計(jì)的許多新光-電配件，使得激發(fā)-檢測(cè)單元和整合式光源非常便攜、非常便于安裝和拆卸。 5）所有的光源都可通過(guò)軟件在2.5 μs的時(shí)間分辨率下控制。 6）測(cè)量光的頻率范圍非常大（1 Hz～400 KHz），因此同一個(gè)測(cè)量光源既可以用于測(cè)量Fo，也可以用于誘發(fā)快速動(dòng)力學(xué)（如熒光快速上升相或閃光弛豫動(dòng)力學(xué)）。 7）用戶可將針對(duì)特殊實(shí)驗(yàn)/樣品的儀器設(shè)置存儲(chǔ)起來(lái)，此后可在完全相同的設(shè)置下重復(fù)實(shí)驗(yàn)。 8）葉綠素?zé)晒夂蚉700的信號(hào)變化完全同步，并且是用同一個(gè)檢測(cè)器檢測(cè)，且不會(huì)互相干擾。 9）測(cè)量藍(lán)藻時(shí)注意：用紅光激發(fā)PS II的熒光，用藍(lán)光或遠(yuǎn)紅光激發(fā)PS I。 |
Dual-PAM-100的這些特點(diǎn)開啟了基礎(chǔ)光合作用研究和應(yīng)用光合作用研究的新途徑。過(guò)去，同步測(cè)量PS I和PS II的量子產(chǎn)量需要很強(qiáng)的背景和熟練的操作技巧，只有光合作用領(lǐng)域的少數(shù)會(huì)這項(xiàng)技術(shù)。現(xiàn)在，即使是初學(xué)者，也可迅速掌握同步測(cè)量PS I和PS II活性的技術(shù)，不再需要復(fù)雜的操作技巧。
主要技術(shù)參數(shù)
P700雙波長(zhǎng)測(cè)量光：LED，830 nm和870 nm
PSII熒光測(cè)量光：LED，460 nm（DUAL-DB）或620 nm（DUAL-DR）
紅色光化光：LED陣列，635 nm；連續(xù)光強(qiáng)2000 μmol m-2 s-1
藍(lán)色光化光：LED，460 nm；連續(xù)光強(qiáng)700 μmol m-2 s-1
單周轉(zhuǎn)飽和閃光（ST）：200000 μmol m-2 s-1，5～50 μs可調(diào)
多周轉(zhuǎn)飽和閃光（MT）：20000 μmol m-2 s-1，1～1000 ms可調(diào)
Kramer的新熒光參數(shù)資料，這是一篇2004年發(fā)表在Photosynthesis Research 上的文章，見(jiàn)如下描述:
Kramer提出的新參數(shù)：
qL，用于代替qP
Y（II）＝Y(jié)＝（Fm’-F）/Fm’
Y（NPQ) 表征PS II處過(guò)量光能耗散為熱，與光保護(hù)有關(guān)
Y（NO） 表征PS II處過(guò)量光能引起的光損傷
Y(II)+Y(NPQ)+Y(NO)=1
Schreiber教授和其學(xué)生Klughammer博士新設(shè)計(jì)的Dual-PAM-100中，借鑒測(cè)量葉綠素?zé)晒獾姆椒ǎ略隽藥讉€(gè)參數(shù)：
Y（I） PS I的量子產(chǎn)量或PS I的光合效率
Y（ND) 表征PS I處過(guò)量光能耗散為熱，與光保護(hù)有關(guān)
Y（NA） 表征PS I處過(guò)量光能引起的光損傷
Y(I)+Y(ND)+Y(NA)=1
色素分子處于氧化態(tài)和還原態(tài)時(shí)，或增加/減少亞基后，其吸收峰會(huì)有變化。基于此原理，P700吸收變化、P515吸收變化（類胡蘿卜素能態(tài)）、P505吸收變化（葉黃素循環(huán)）等均可通過(guò)Dual-PAM-100測(cè)量。主機(jī)共用，只是更換激發(fā)-檢測(cè)單元即可。此外，Dual-PAM-100還可用于測(cè)量NADPH熒光、9AA熒光（跨膜質(zhì)子梯度）等。
部分利用DUAL-PAM-100研究藻類的P700文獻(xiàn)
1.Ma W, Mi H, Shen Y: Influence of the redox state of QA on phycobilisome mobility in the cyanobacterium Synechocystis sp. strain PCC 6803 Journal of Luminescence2010:in press.[DUAL-PAM-100]
2.Bernát G, Waschewski N, Rögner M: Towards efficient hydrogen production: the impact of antenna size and external factors on electron transport dynamics in Synechocystis PCC 6803 Photosynthesis Research2009, 99(3):205-216.[DUAL-PAM-100]
3.Chiu Y-F, Lin W-C, Wu C-M, Chen Y-H, Hung C-H, Ke S-C, Chu H-A: Identification and characterization of a cytochrome b559 Synechocystis 6803 mutant spontaneously generated from DCMU-inhibited photoheterotrophical growth conditions Biochimica et Biophysica Acta2009, 1787(10):1179-1188.[DUAL-PAM-100]
4.Grouneva I, Jakob T, Wilhelm C, Goss R: The regulation of xanthophyll cycle activity and of non-photochemical fluorescence quenching by two alternative electron flows in the diatoms Phaeodactylum tricornutum and Cyclotella meneghiniana Biochimica et Biophysica Acta 2009, 1787(7):929-938.[DUAL-PAM-100]
5.Kromkamp JC, Beardall J, Sukenik A, Kopeck J, Masojidek J, van Bergeijk S, Gabai S, Shaham E, Yamshon A: Short-term variations in photosynthetic parameters of Nannochloropsis cultures grown in two types of outdoor mass cultivation systems. Aquatic Microbial Ecology2009, 56:309-322.[DUAL-PAM, Flow-Through WATER-PAM]
6.Lin A-P, Wang G-C, Yang F, Pan G-H: Photosynthetic parameters of sexually different parts of Porphyra katadai var. hemiphylla (Bangiales, Rhodophyta) during dehydration and re-hydration Planta2009, 229(4):803-810.[DUAL-PAM-100]
7.Perreault F, Ali NA, Saison C, Popovic R, Juneau P: Dichromate effect on energy dissipation of photosystem II and photosystem I in Chlamydomonas reinhardtii. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology2009, 96(1):24-29.[DUAL-PAM-100]
8.Schultze M, Forberich B, Rexroth S, Dyczmons NG, Roegner M, Appel J: Localization of cytochrome b6f complexes implies an incomplete respiratory chain in cytoplasmic membranes of the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 Biochimica et Biophysica Acta2009, 1787(12):1479-1485.[DUAL-PAM-100]
9.Sukenik A, Beardall J, Kromkamp JC, Kopeck J, Masojídek J, van Bergeijk S, Gabai S, Shaham E, Yamshon A: Photosynthetic performance of outdoor Nannochloropsis mass cultures under a widerange of environmental conditions. Aquatic Microbial Ecology2009, 56(2-3):297-308.[DUAL-PAM-100, FLOW THROUGH WATER-PAM]
10.Tsunoyama Y, Bernát G, Dyczmons NG, Schneider D, Rögner M: Multiple rieske proteins enable short- and long-term light adaptation of Synechocystis sp. PCC 6803. Journal of Biological Chemistry2009, 284:27875-27883.[DUAL-PAM-100]
11.Bailey S, Melis A, Mackey KRM, Cardol P, Finazzi G, Dijken Gv, Berge GM, Arrigo K, Shrager J, Grossman A: Alternative photosynthetic electron flow to oxygen in marine Synechococcus Biochimica et Biophysica Acta 2008, 1777(3):269-276.[DUAL-PAM-100, WATER-PAM]
12.François P, Nadia AA, Cyril S, Philippe J, Radovan P: Alteration of Energy Dissipation by Dichromate in Xanthophyll Deficient Mutants of Chlamydomonas reinhardtii In: Photosynthesis Energy from the Sun: 14th International Congress on Photosynthesis. Edited by Allen JF, Gantt E, Golbeck JH, Osmond B: Springer; 2008: 1535-1538.
13.Ma W, Chen L, Wei L, Wang Q: Excitation energy transfer between photosystems in the cyanobacterium Synechocystis 6803 Journal of Luminescence2008, 128(3):546-548.[DUAL-PAM-100]
14.Ma W, Wei L, Wang Q: The response of electron transport mediated by active NADPH dehydrogenase complexes to heat stress in the cyanobacterium Synechocystis 6803 Science in China2008, 51(12):1082-1087.[dual-pam-100]
15.Xu M, Bernát G, Singh A, Mi H, Rögner M, Pakrasi HB, Ogawa T: Properties of mutants of Synechocystis sp. strain PCC 6803 lacking inorganic carbon sequestration systems. Plant Cell and Physiology2008, 49(11):1672-1677.[DUAL-PAM-100]
