長時間細胞動態(tài)成像及數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)

IncuCyte Zoom：第二代長時間動態(tài)活細胞成像及數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)

　　目前，大部分的細胞檢測方法采用的仍然是傳統(tǒng)的終點法——給出終結(jié)果，而且往往需要標(biāo)記細胞和破壞細胞。這種方法無法得到細胞在生長時的真正狀態(tài)，也無法對細胞的生長過程做出動態(tài)的監(jiān)測和分析。美國Essen公司開發(fā)了第二代長時間實時動態(tài)活細胞成像分析儀——IncuCyte Zoom，用一種非侵入式的方法，記錄細胞的實時生長狀態(tài)。這種成像方法，被稱為“實時細胞內(nèi)涵成像”（Live Content Imaging），擴充了用戶記錄和理解細胞生長、細胞行為和細胞形態(tài)的途徑。
IncuCyte Zoom是一套用于非傷害的、長時間實時動態(tài)的活細胞成像分析平臺。IncuCyte分為信號采集機和控制機兩部分，信號采集機可放置于培養(yǎng)箱中，中間放置多種規(guī)格尺寸的板、皿、瓶及載玻片，在其下方有顯微照相設(shè)備，通過顯微拍照，對培養(yǎng)細胞進行連續(xù)的監(jiān)測，并通過聯(lián)網(wǎng)的電腦進行遠程控制、數(shù)據(jù)讀取與分析。系統(tǒng)可自動收集每個時間點的相差圖像和紅/綠熒光圖像。用戶除了可以得到各種格式的圖像或動態(tài)錄像外，還可以得到由系統(tǒng)軟件自動依據(jù)飽和度和計數(shù)分析生成的基于圖像應(yīng)用的圖表，以顯示細胞的變化及趨勢。如顯示細胞增殖的飽和度vs時間圖表，顯示經(jīng)生長的經(jīng)突長度vs時間圖表，顯示W(wǎng)ound Healing實驗的相對傷口密度vs時間圖表，或顯示血管的血管長度vs時間圖表。
IncuCyte的優(yōu)勢：1）培養(yǎng)的細胞用高清晰度相差顯微鏡或熒光顯微鏡直接監(jiān)測，為非破壞性的監(jiān)測，細胞不用染色便可以觀察監(jiān)測，影像；2）監(jiān)測過程中細胞無需離開培養(yǎng)箱，不用擔(dān)心培養(yǎng)條件的改變對細胞的影響；3）真正的長時間的動態(tài)活細胞成像，可達數(shù)天或數(shù)月，高清晰度相差成像能消除微孔板的彎液面缺陷（meniscus artifacts），且沒有傳統(tǒng)顯微系統(tǒng)的光暈問題，可以在384微孔板內(nèi)監(jiān)測細胞形態(tài)；4）圖像處理軟件自動依據(jù)飽和度和計數(shù)分析，量化細胞增殖；5）自動輸出細胞生長曲線和細胞生長錄像；6）實時監(jiān)控，可改變傳統(tǒng)的“終點法”實驗方法，數(shù)據(jù)豐富，更準(zhǔn)確、更靈活；7）高通量，可同時監(jiān)測6塊標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的細胞培養(yǎng)板/皿/瓶/載玻片，包括96-孔微孔板和384-孔微孔板，細胞在384-孔微孔板內(nèi)實驗，可以減少寶貴的藥品消耗；8）支持過200種的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)容器，無需的培養(yǎng)容器，節(jié)約后期實驗成本；9）可遠程監(jiān)控，進行數(shù)據(jù)讀取和分析，無需反復(fù)出入細胞房，避免了潛在的污染隱患及人工出入觀測之麻煩。

不同濃度十字孢堿對 A549 球體生長的影響 

（十） T 細胞免疫殺傷

應(yīng)用IncuCyte ZOOM用于研究T細胞免疫殺傷細胞的全過程和特異性，無需lift細胞或者使用Ab標(biāo)記或放射性同位素方法。此外高清晰度圖像和動態(tài)影像可以很清楚的了解T細胞殺傷過程中潛在的生物學(xué)過程。

anti-CD3 和 IL-2 殺傷 SKOV3 NucLight Red? cells(2K/well) 與 PBMC’s  (20K/well) 混合培養(yǎng)過程 圖（已加入 caspase 3/7 試劑）

IncuCyte Zoom的應(yīng)用總結(jié)：
1）監(jiān)測細胞增殖（Proliferation）：通過實時動態(tài)成像，對細胞增殖進行非侵入性的、定量的分析；
2）細胞培養(yǎng)質(zhì)控（Cell Culture QC）/細胞培養(yǎng)優(yōu)化（Cell Culture Optimization）：通過實時動態(tài)成像，可生成基于細胞飽和度的動態(tài)生長曲線；
3）監(jiān)測細胞毒性（Cytotoxicity）：將染料和細胞混合然后讀數(shù)，操作者可離開，是基于染料的實驗；
4）監(jiān)測細胞凋亡（Apoptosis）：將凋亡試劑和細胞混合然后讀數(shù)，操作者可離開，是基于染料的實驗；
5）監(jiān)測細胞遷移（Cell Migration）/細胞侵襲（Cell Invasion）：配套高度一致性的96孔傷口劃痕工具，實時動態(tài)監(jiān)測傷口的愈合過程，可得到細胞運動的定量指標(biāo)；
6）監(jiān)測血管（Angiogenesis）：使用通過驗證的血管試劑盒，具有動態(tài)分析血管的定量指標(biāo)；
7）監(jiān)測基因（Reporter Gene）：細胞無需裂解，可獲得實時動態(tài)數(shù)據(jù)；
8）經(jīng)生長跟蹤（Kinetic NeuroTrack）：可定量分析經(jīng)元細胞的經(jīng)突的生長狀況。
9）3D球體觀察（3D Spheroid）：可自動計算3D球體的生長和收縮，實時動態(tài)地定量球體參數(shù)（如尺寸和熒光度）。
10）T細胞免疫殺傷： 用于研究 T 細胞免疫殺傷細胞的全過程和特異性，無需 lift 細胞或者使用 Ab 標(biāo)記或放射性同位素方法。