1.      原理本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的隱性孔雀石綠隱性結(jié)晶紫和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭孔隱性雀石綠抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物隱性孔雀石綠隱性結(jié)晶紫的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)隱性孔雀石綠隱性結(jié)晶紫的含量。 2.    試劑盒組成（1）       96孔酶標(biāo)板：1塊。（2）       標(biāo)準(zhǔn)品液:（1.0ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.4ppb、1.6ppb、6.4ppb、25.6ppb。（3）       酶標(biāo)記物：    1瓶（12ml）。（4）       抗體工作液：  1瓶（7ml）。（5）       底物緩沖液：  1瓶（7ml）。（6）       底物液：      1瓶（7ml）。（7）       終止液：      1瓶（7ml）。（8）       20倍濃縮洗液：（50ml）加蒸餾水稀釋到1000ml。（9）       提取液A（10）   提取液B 3.      需要但試劑盒中不提供的器材和試劑（1）設(shè)備…微孔板酶標(biāo)儀(450nm)…均質(zhì)器…振蕩器…離心機(jī)…各種量程的微量移液器（2）試劑…蒸餾水…環(huán)已烷 4.      注意事項(xiàng)（1）終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。（2）不要使用已過有效日期的隱性孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用，以免降低靈敏度。（3）0標(biāo)準(zhǔn)液的A₄₅₀nm<0.6時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)，請(qǐng)勿使用。（4）顯色劑變藍(lán)，表明已變質(zhì)，請(qǐng)勿使用。 5.      儲(chǔ)存條件（1）       2-8℃保存，切勿冷凍。（2）       將不用的酶標(biāo)板放進(jìn)原袋中重新密封。（3）       酶標(biāo)記物和顯色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 6.      樣品處理（1）       魚/蝦樣品的準(zhǔn)備（稀釋倍數(shù)2）A）魚蝦去皮取肉，用勻漿器均質(zhì)樣品；B）稱取1.0g均質(zhì)好的樣品，放入15mL離心管中,加入0.5mL的提取液A,再加入1.5mL的提取液B，渦旋5-10分鐘；C）3000rpm離心5分鐘，取上清，D）取上清50μl進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。（2）       水質(zhì)樣品（稀釋倍數(shù)1）離心后取50μl作ELISA分析。 7.      免疫分析時(shí)試劑的準(zhǔn)備（1）       注意事項(xiàng)a) 使用之前將所有試劑平衡至室溫。b) 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。c) 在使用中不要讓微孔干燥。d) EIA分析的重復(fù)性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細(xì)按照推薦的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點(diǎn)。e)         在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。（2）濃縮洗滌液使用前應(yīng)根據(jù)所需量進(jìn)行20倍稀釋，即按1ml濃縮洗滌液加入19ml蒸餾水的比例進(jìn)行稀釋。